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试验九止血药与抗凝血药的作用观察doc

归档日期:06-03       文本归类:背囊式滤水器      文章编辑:爱尚语录

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  动物医学专业 实 验 指 导 (自编教材) 编写人员: 刘文强 李玉保 苏建青 褚秀玲 司振书 路建彪 秦绪岭 马秀亮 裴兰英 聊城大学农学院实验管理中心编印 目 录 第一部分 动物科学基础实验 1 实验一 家畜骨骼形态的观察 1 实验二 家畜肌肉形态的观察 2 实验三 家畜内脏器官的观察 4 实验四 家禽活体解剖 6 实验五 家兔活体解剖 7 实验六 羊活体解剖 9 实验七 动物浸制标本的制作 12 实验八 显微镜的使用及血涂片的制备与观察 13 实验九 四大组织的组织结构观察 16 实验十 肾脏、淋巴结和脾脏的组织结构观察 19 实验十一 红细胞脆性实验 21 实验十二 血红蛋白含量的测定 23 实验十三 心率和脉搏的测定 25 实验十四 动物体温的测定 27 实验十五 胰岛素与肾上腺素对血糖的影响 28 实验十六 脊髓反射 (选修) 29 第二部分 动物医学基础实验 31 实验一 局部血液循环障碍 31 实验二 局部组织和细胞损伤病变 32 实验三 炎症 33 实验四 肿瘤 34 实验五 动物病理组织切片制作 35 实验六 药物的配伍禁忌 39 实验七 不同给药途径对药物作用的影响 42 实验八 泻药的药理作用观察 44 实验九 止血药与抗凝血药的作用观察 46 实验十 利多卡因和普鲁卡因的表面麻醉作用观察 48 实验十一 止血药与抗凝血药的作用观察 50 实验十二 中药酊剂的制备 52 实验十三 纸片法、打孔法对抗菌药的抗菌作用比较 54 实验十四 有机磷酸酯类的中毒与解救 56 实验十五 防腐消毒药的配制、作用观察及应用 57 实验十六 布氏杆菌的血清学诊断实验 58 实验十七 鸡白痢沙门氏菌的平板凝集试验 61 实验十八 琼脂扩散试验诊断鸡传染性法氏囊病 63 实验十九 新城疫病毒的血凝与血凝抑制 65 附 录 67 实验二十 鸡新城疫油苗制备 68 实验二十一 免疫球蛋白的制备 70 实验二十二 中和试验 78 实验二十三 油镜的使用及细菌形态观察 83 实验二十四 细菌培养基的制备 85 实验二十五 细菌的分离培养与移植 87 实验二十六 细菌标本片的制备及染色 88 第三部分 临床兽医学实验 1 实验一 跛行的诊断 1 实验二 瘤胃酸中毒的诊断与治疗 3 实验三 小动物肠梗阻的临床诊断与治疗 5 实验四 胃肠炎的诊断与治疗 7 实验五 小叶性肺炎的诊断与治疗 11 实验六 亚硝酸盐中毒与解救 14 实验七 有机磷中毒与解救 15 实验八 钙磷代谢紊乱性疾病的诊断 16 实验九 动物医院现场实习 18 实验十 创伤的治疗 19 实验十一 外科炎症疗法 21 实验十二 麻醉 28 实验十三 无菌术及外科临床器械的准备 30 实验十四 切开、止血、缝合 31 实验十五 气管切开术 32 实验十六 剖腹探查术 33 实验十七 食道切开术 34 实验十八 声带切除术 35 实验十九 瘤胃切开术 36 实验二十 肠管切除与吻合术 39 实验二十一 膀胱切开术 41 实验二十二 肋骨摘除术 42 实验二十三 眼的检查法 43 实验二十四 眼球摘除术 45 实验二十五 第三眼睑腺摘除术 47 实验二十六 分娩预兆的观察及正常分娩的接产 48 实验二十七 骨盆和难产助产器械的使用 51 实验二十八 剖腹产 55 实验三十一 X线 实验三十二 B超机的操作 62 实验三十三 肝脏和心脏的B超检查 63 第四部分 预防兽医学实验 72 实验一 动物传染病实验室常用仪器的认识 72 实验二 各种不同环境中的病原细菌检测 76 实验三 ELISA检测猪瘟血清中的抗体 78 实验四 兽医生物制品的免疫接种和采血 80 实验五 动物传染病剖检、取材和诊断 84 实验六 猪与禽常见传染病病原的PCR诊断 86 实验七 常见畜禽病原菌药物敏感实验 90 实验八 动物病毒接种鸡胚和鸡胚成纤维细胞 92 实验九 畜禽体内蠕虫类病原基本形态观察 94 实验十 动物寄生原虫和外寄生虫基本形态观察 95 实验十一 病鸡剖检 96 实验十二 新城疫的实验室诊断 97 实验十三 禽(鸡)大肠杆菌病实验室诊断 100 第一部分 动物科学基础实验 实验一 家畜骨骼形态的观察 一、目的要求:1.认识长骨的一般构造。2.认识关节的一般构造。3.认识家畜全身骨骼的组成:掌握前、后肢各关节的组成及脊柱、胸廓核骨盆的构造。 二、材料用具:新鲜长骨纵剖面标本、小牛(或羊或猪)的髋关节或膝关节标本、牛、马整体骨骼标本。 三、实验内容: (一)观察长骨的构造:取家畜新鲜长骨纵剖面标本,对照教材上的插图,分别观察骨膜、骨质和骨髓的构造。 (二)观察关节的构造:取小牛(或羊或猪)的髋关节或膝关节,纵行切除半个关节囊,露出关节腔。再对照教材上的插图,观察关节的基本构造(关节面、关节囊、关节腔)。 (三)牛整体骨骼的观察:用牛整体骨骼标本,对照教材上的插图和挂图,按照头部骨骼、躯干骨骼、前肢骨骼和后肢骨骼的。 (四)顺序进行观察,注意以下内容: 1.全身各骨的名称、形态特点及位置关系。 2.前、后肢各关节及脊柱、胸廓和骨盆的组成。 3.对牛和马的骨骼形态、数目进行比较 四、教学组织:学生分六组;教师认真讲解操作规程,边讲解边演示;在学生基本清楚的情况下,教师可以进行分别指导。 五、作业:绘牛的四肢骨骼图,并标出各骨名称 实验二 家畜肌肉形态的观察 一、实验目的要求:通过实验,验证和巩固家畜肌肉、筋膜、腱鞘、黏液囊的基本概念,熟悉家畜全身肌肉的结 构、形态特点。掌握主要肌肉的作用,掌握胸腔、腹腔的构造、腹股沟管的组成与构造。 二、实验材料:牛、猪整体塑形标本、解剖器械。 三、实验内容 :肌肉标本观察:按顺序观察下列主要肌肉。 (一) 头部主要肌肉 I.面部肌 咀嚼肌(咬肌、颞肌)。 (二) 躯干的主要肌肉 1.脊柱肌:重点观察背腰最长肌和髂肋肌。 2.颈腹侧肌:主要肌肉有胸头肌(构成了颈静脉沟的下界) 3.胸壁肌肉主要观察: (1)肋间外肌和肋间内肌。 (2)膈:位于胸、腹之间的圆顶状的板状肌,凸面向前。 4 腹壁肌:是构成腹腔侧壁和下壁的板状肌,自外向内,由腹外斜肌、腹内斜肌、腹直肌和 腹横肌四层组成。 (三) 前肢主要肌肉 1.肩带与躯干连接的肌肉 (1) 背侧肌群主要有:斜方肌、菱形肌、臂头肌和背阔肌。牛有肩胛横突肌。 (2) 腹侧肌群本肌群主要有腹侧锯肌和胸肌。 2.肩部肌:作用于肩关节的主要肌肉 (1) 伸肌组冈上肌。 (2) 屈肌组有三角肌、大圆肌。 (3) 内收肌有肩胛下肌。 (4) 外展肌有冈下肌。 3.臂部肌:作用于肘关节的肌肉 (1)伸肌组有臂三头肌、前臂筋膜张肌。 (2)屈肌组有臂二头肌、臂肌。 4.前臂部肌和前脚部肌:作用于腕关节和指关节,分背外侧肌群和掌侧肌群。 (四) 后肢肌肉 1.髋部肌:作用于髋关节的肌肉 (1)伸肌组有臀肌、股二头肌、半腱肌、半膜肌。 (2)屈肌组有股阔筋膜张肌。 2.股部肌:作用于膝关节的股四头肌。 3.小腿部肌和后脚部肌群:对跗关节和趾关节起作用 (五)胸腔构造、腹腔的构造、腹股沟管的组成与构造 四、教学方式:老师用标本示教,学生观察。 五、考核要求:观察中抽查、提问。 六、.实验报告:写出前肢肌,后肢肌,呼吸肌和腹壁肌的主要肌肉名称和作用。 实验三 家畜内脏器官的观察 一、目的要求:正确指出反刍动物的四个胃;各种动物小肠、盲肠、结肠、心、肺、喉、卵巢、肾等的位置与形态特征。 二、材料用具:牛模型、猪模型、解剖刀、剪刀、镊子 三、实验内容: (一)消化器官的观察 1.口腔 牛唇短厚、上唇无毛与鼻孔间形成鼻唇镜。羊的上唇中间有明显的纵沟。牛羊颊黏膜均有尖端向后的角质乳头,上颌无切齿、由角质化的切板所代替。 2.胃 牛羊均有四个胃,其中瘤胃最大,而网胃(牛)、瓣胃(羊)最小。仔细分辨瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃4个胃的形态、结构、找出前沟、后沟、左、右纵沟,切开瘤胃辩识相应的肉柱、瘤胃岛、瘤胃房、后背盲囊、后腹盲囊、瘤胃隐窝、瘤胃网口、食管沟、网瓣胃口、网胃黏膜形成的皱褶,继续切开瓣胃、皱胃,辩识各级瓣叶、瓣胃沟及皱胃黏膜皱褶褐黏膜分区。 3.小肠 全部位于右侧腹腔。 4.大肠 以回盲口为界,探察盲肠和结肠。其中盲肠位于腹腔右半部的上1/3处。结肠盘曲成圆盘状,区分初绊、旋绊(向心回、离心回)、终绊,最后接直肠。 5.肝和胰 肝的分叶不明显、有胆囊,完全位于右季肋部;胰呈长板状。 (二)呼吸器官的观察 1.鼻、咽的观察 用头部标本观察鼻中隔、鼻甲骨、鼻道、鼻黏膜各区、额窦、上颌窦和咽。 2.喉、气管和支气管的观察 用离体呼吸器官标本观察喉软骨、喉黏膜、喉口、气管软骨环、气管黏膜、支气管、支气管黏膜。 3.肺的观察 用离体标本和胸腔新鲜标本观察肺的颜色、位置关系,肺的三面和三缘,心压迹、心切迹、肺门,触摸肺的质地,分辨肺的分叶和肺小叶。 4.纵隔、胸膜和胸膜腔的观察 用胸腔新鲜标本观察纵隔、各区胸膜及胸膜腔。 (三)泌尿器官的观察 1.用浸制标本观察肾纤维膜、肾门、肾窦、皮质、髓质、肾乳头、肾盏、集收管或肾盂。 2.输尿管、膀胱和尿道的观察 用整套泌尿系统离体标本观察输尿管(注意起止端)、膀胱顶、膀胱体、膀胱颈、膀胱外膜、膀胱黏膜、公畜骨盆部尿道和阴茎部尿道、尿道外口、母畜尿道外口、尿道憩室。 (四)生殖器官的观察 1.公畜生殖器官 注意观察阴囊、睾丸、附睾、精索和输精管的形态、结构及它们之间的位置关系。 2.母畜生殖器官 注意观察卵巢、子宫的形态、结构、位置及各器官之间的位置关系。 (五)心血管系统的观察 1.心包 注意心包的壁层(纤维层)和紧贴心脏的心外膜之间构成心包腔,腔内有少量滑液。 2.剥去心包,观察心脏的外形、冠状沟、室间沟、心房、心室及连接在心脏上的各类血管,并指出各自的名称及血流方向。 3.沿右侧做纵切,切开右心房和右心室、右心室口。 观察右心房和前、后腔静脉入口,用直尺量心房肌的厚度(记录)。 观察右心室和肺动脉口的瓣膜,右心室壁的厚度(测量记录)、乳头肌、腱索。 观察右房室瓣,注意腱索附着点。 4.沿左侧做纵切,切开左心室和左心房、左房室口。 观察左心室壁,测量其厚度并和右心室壁及心房作比较。 观察左房室口的瓣膜,并和右房室瓣作比较。 观察左心房,找到肺静脉的入口。 沿左房室瓣深面找到主动脉口并做纵形切口,观察主动脉瓣的结构。 四、教学组织:在教师指导下,学生全面进行该项目的训练,注意操作的规范性,考核见考核方案。 五、作业:请将观察结果写成实验报告。学生熟练掌握家畜消化系统各部在体内的位置。 备注:此内容为技能项目,考核办法、时间与地点:教师认真讲解示范操作,黑板上写出评分标准,逐人考核,在教学实习时进行,(详细见技能考核方案)。 实验四 家禽活体解剖 一、目的要求:学习禽体解剖的基本技能。掌握家禽消化、呼吸、泌尿和生殖系统各个器官的形态构造及位置关系;观察各系统的主要结构特征;重点观察消化、呼吸、泌尿、生殖系统各器官的形态、位置和结构特征。 二、材料用具:公鸡或母鸡、解剖刀、剪、骨钳、镊、解剖板、细胶管(0.5cm)棉线绳、脸盆和毛刷。 三、实验内容: (一)将禽切颈(不可断头)放血致死,置于解剖板上,用水将全身羽毛刷湿。 (二)将禽仰卧,由喙腹侧开始,沿颈、胸、腹正中直至泄殖孔附近将皮肤剪开。向两侧剥皮至翼根和腹股沟部。 (三)自胸骨后端至泄殖腔剪开腹壁再从此切口沿胸骨两侧剪断胸肋骨至锁骨,小心的剪断心、肝与胸骨间的系膜,将胸骨翻向前方。 (四)由喉口插入细胶管,慢慢吹气并用棉线绳结扎气管,观察各气囊的位置与形状,然后剪除胸骨。 (五)内脏器官的观察 1.消化系统各器官的观察:观察喙、腭 裂、舌、食管、鸡嗉囊、腺胃和肌胃并注 意腺胃乳头、类角质膜、胃黏膜、肌层和 外膜以及幽门;确认十二指肠绊、肝、胰 、空肠、回肠、两条盲肠、直肠和泄殖腔 并注意区别粪道、泻殖道和肛道,注意腔 上囊和盲肠扁桃体的所在位置;注意脾脏 的位置、形态。 2.呼吸系统各器官的观察:观察鼻孔、 喉口、气管黏膜、鸣管、支气管和肺,注 意肺的颜色、位置。 3.泌尿系统各器官的观察:观察左右两 肾和左右输尿管,注意肾位置、颜色和分 叶。 4.生殖系统各器官的观察:观察公禽的睾丸、输精管,注意其位置、颜色,注 意输精管的起止端。观察母禽的卵巢和输卵管,注意卵巢的形态和各期卵泡,输卵 管五段的区分及各部黏膜面,输卵管伞、腹腔口及输卵管与泄殖腔的连通关系。 (六)心和坐骨神经观察:观察心和心包,注意其位置及心腔结构;翻开股二头肌,观察坐骨神经,注意位置关系及该神经的颜色和粗细均匀情况。 四、教学组织:学生分六组;教师认真讲解操作规程,边讲解边演示;在学生基本清楚的情况下,教师可以进行分别指导。 五、作业: 1.绘出禽消化系统简图 2.绘出母禽生殖系统简图 实验五 家兔活体解剖 一、实验目的:通过对家兔的解剖观察,掌握哺乳类消化系统、呼吸系统、循环系统、泌尿系统和生殖系统的结构特点。 二、材料和用具: 活家兔(每组一只)、一次性注射器及针头、常规解剖器械、骨剪、脱脂棉。 三、实验内容: 1.从耳缘静脉注射空气,将家兔处死。从耳廓背部外侧缘的静脉注射一针筒空气,注射后及时冲洗针筒和针头,防止堵塞。 2.解剖观察家兔的消化、呼吸、循环、泌尿和生殖系统。 兔子处死以后,将其腹部朝上置于解剖盘内解剖观察。 (1)消化系统: 唾液腺:兔子具有4对唾液腺(一般哺乳动物只有3对),即耳下腺(腮腺)、颌下腺、舌下腺、眶下腺。耳下腺位于耳廓基部腹面前方的皮肤下面,淡红色;颌下腺是一种卵圆形腺体,位于下颌的后部两侧的内表面;舌下腺位于近下颌骨联合处,舌的下面,颌下腺的前内侧处;眶下腺是一对粉红色的腺体,位于眼窝的底部。 口腔和咽部:用刀沿口角割开,把咬肌切断,用力将上下颌掰开,观察口腔和咽部。兔上唇中央有一裂缝,牙齿为异型齿,齿式/=28,口腔顶部为硬腭,后部是软腭,软腭之后为咽部,咽部是食物和气体的共同通道。 下面解剖胸腹腔,观察内脏各器官系统。将兔子的腹部向上,用剪刀从泄殖孔稍前方剖一横口,沿腹中线剪到胸骨的剑突处,此处即胸腔下缘,转向左右割开腹壁,又从泄殖孔的切口处同样左右割开腹壁,暴露腹腔。先观察各器官的自然位置,辨认肝、胃、小肠、大肠和直肠各部分。 胃:囊状,横卧于膈肌后面,入口称喷门,出口称幽门。 小肠:肠管长而细,分为十二指肠、空肠和回肠三段。十二指肠呈“U”形,空肠和回肠界限不易区分。 大肠:分为盲肠、结肠和直肠三段。盲肠为大肠的起始段,肠管最粗大,相当于一个发酵罐,其末端有蚓突,结肠表面有横褶,直肠细长。在十二指肠系膜上有分散不规则的胰脏,肝脏位于腹腔的前部,分成5-6叶,借胆总管开口于十二指肠。 (2)呼吸系统 先打开胸腔。用左手轻轻掀起胸骨,右手持骨剪在胸骨左右侧剪断肋骨,暴露胸腔。注意观察胸腔中心脏和肺的位置。轻轻拨开心脏和相邻的部分血管,可以看见气管及其背部的食管。 呼吸系统从外鼻孔开始,空气通过外鼻孔进入鼻腔再经内鼻孔入咽,再由咽进入喉门。喉门由几种软骨组成,喉与气管相接。气管以“C”字形软骨支撑。肺呈海绵状,分左右两叶,位于胸腔内,左肺二叶,右肺四叶。 (3)循环系统 心脏:具独立的四室,能进行完全的双循环。心室壁较心房厚,尤其是左心室最厚。左右房室口有瓣膜,左边为二尖瓣,右边三尖瓣,能防止血液倒流。动脉:从左心室发出一条粗大的左体动脉弓,是全身的动脉主干。动脉弓发出到头颈部去的左右颈总动脉和到前肢去的左右锁骨下动脉。动脉弓向后弯曲,在胸腔的一段称为胸主动脉,穿过膈肌进入腹腔后,称为腹主动脉。从右心室发出的肺动脉分为左右肺动脉入肺。在动脉弓和肺动脉基部有防止血液倒流的动脉瓣。 静脉:全身回流的静脉血通过一对前大静脉和一支后大静脉注入右心房。 (4)泌尿系统 肾脏:位于腹腔后面脊柱的两侧,肾脏内侧前缘有一肾上腺。输尿管从肾脏内侧的肾门通出,向后开口于梨形的膀胱。 (5)生殖系统 雄性生殖器官:有睾丸1对,位于腹腔内,性成熟以后下降到阴囊内。睾丸通附睾,附睾移行为输精管,然后通入尿道。 雌性生殖器官:由一对卵巢、输卵管和子宫构成。卵巢很小,椭圆形;输卵管是一对弯曲的细管,向下移行为较宽大的子宫,如果有孕,子宫就膨大。左右子宫在下端会合成阴道。 四、作业 试述家兔消化系统的组成、形态及结构特点。 五、分析与讨论 1.在用剪刀剖开胸腹腔时,剪刀头不要下得太深,以免伤及内脏。 2.为了进一步观察心脏和喉头的内部结构,最好将它们从原位离体下来,然后进行解剖。 实验六 羊活体解剖 一、实验目的:通过活体家畜羊的解剖活动,使理论联系实践,做到复习和巩固一个学期以来所学到的家畜解剖学的基本知识,并进一步掌握不同家畜品种的各系统器官的解剖结构特点和练习家畜解剖的操作技能和方法,从而为后期有关课程和为将来畜牧生产服务打下良好的基础。 二、工具和材料: 实验动物(羊)1头(只)/班;解剖器械4套,包括手术刀、手术剪、镊子、止血钳、骨剪、缝合线等。 三、实验内容: 观察各系统的主要结构特征;重点观察消化、呼吸、泌尿、生殖系统各器官的形态、位置和结构特征;植物性神经的分支及走向。 1. 活体观察 毛色:褐色 前后关节:健全 蹄着地情况:观察巩膜为白色,瞳孔为椭圆形,眼结膜粉红色。健康状况:良好 叫声、鼻镜、 眼神、 呼吸时胸部起伏情况。 2. 活体触摸 左手抓住鼻梁和颊部,右手抓住下颌,用劲拉开口腔(用两指伸入齿间缘,用力往下压)拉出舌头。观察口腔粘膜和舌粘膜。 用手触摸肩前淋巴结、髂下淋巴结。用手触摸肋骨、肋间隙、髋结节、坐骨结节、髋关节、肩关节 触摸乳房,乳头两个 触摸关节和蹄部。触摸喉头、气管,按压颈静脉沟后部,颈静脉怒胀彭起。 3. 处死 磨刀,绑定。 右手按压住颈静脉沟的颈基部,让颈静脉鼓起,主刀手迅速于颈静脉沟的后1/3部切开皮肤约6厘米长。 钝性分离皮下组织,把颈静脉挤向上方,继续分离结缔组织,在气管的侧面即可摸到搏动的颈动脉。 把颈动脉拉出,分离迷走交感干,用止血钳夹住颈动脉的头端,用一只手拉住颈动脉的胸段,用手术刀切开颈动脉。进行放血。 抽筋后,用手触摸睫毛,判断是否死亡(如果睫毛不动,则表示已经死亡)。 瞳孔放大。放血后称重。 剥皮:在四肢系部环切,再沿内侧正中线纵切至腹正中线。 从下颌至肛门沿腹正中线做纵切切开皮肤。在正中线处向外顺序剥开皮肤,剥皮时其他人员将皮拉紧沿皮下组织层切割,先剥四肢后剥躯干。(头部、颈部皮肤较厚硬,要耐心慢慢地切割)。皮肤剥完后,受限观察全身的浅筋膜(疏松结缔组织——皮下组织)和深筋膜(致密结缔组织)的分布,同时观察体表淋巴结、颌下淋巴结、颈浅(肩前)淋巴结、股前(髂下)淋巴结、腹股沟管淋巴结、乳房淋巴结的位置,色泽和大小。 4. 观察肌肉:冈上肌、冈下肌、肱三头肌、髂肋肌、菱形肌、斜方肌、背阔肌、腹内斜肌、腹横肌、腹直肌、 腹侧锯肌、最后肋间神经、髂下腹神经、髂腹股沟神经。 5. 头部解剖和观察: 用钢锯把头纵面锯开,用刀取出舌头。 纵剖面观察:用钢锯把头部纵切面锯开,观察。 颅腔:颅腔内有脑组织填满,分清大脑、小脑和脑干的部分以及第三脑室、第四脑室。把脑挖出,观察新鲜脑的三层脑膜和沟回,找到脑垂体。 鼻腔:鼻腔内有鼻中膈和位于其两侧的鼻甲和鼻道。观察有四个鼻道,分上中下和总鼻道,和他们的通向周围的孔。 鼻旁窦:在硬腭内有腭窦,鼻腔侧壁有上颌窦,颅腔周围有额窦舌:由舌肌构成,表面被覆黏膜,可分为舌尖、舌体和舌根三部分。豆状乳头较少,有圆扁平在舌圆枕上,轮廓状乳头较大,中间圆形,四周有沟环绕,构成舌圆枕后部两侧。 6. 胸部解剖和观察 首先切断斜方肌、菱形肌、肩胛横突肌、背阔肌和腹侧锯肌,手握肩胛向外向下拉,是肩胛部慢慢脱离胸壁。切除右侧胸壁上的肩带肌肉,腹外斜肌附着部以及肋间肌,让胸腔器官暴露在肋骨间,注意观察肺、心在胸壁肋间的投影位置和隔肌的附着线。除最后肋骨和肋弓外,剪断胸壁所有肋骨的上、下端和隔肌的附着线,即可把胸壁取下来,整个胸腔即暴露。 心 :观察心的外形,分清进出心腔的主动脉, 前、腔静脉,肺动脉,肺静脉。分清心房心室的部位,以及心耳部位。膈:为宜宽大的圆形肌,位于胸、腹腔之间,分中央的腱质部和周围的肉质部。实验中观察到膈有三个裂孔,自上而下分别是主动脉裂孔、食管裂孔和腔静脉孔。 7. 腹部解剖和观察 腹部肌肉由表至里由腹外斜肌、腹内斜肌、腹直肌、和腹横肌构成。 腹白线——两侧的腹壁的腹内、外斜肌和腹横肌的在腹腔底壁正中交织而成的白色纤维索。 腹腔内脏器官:切除右腹壁肌肉和膈,腹腔底壁切至中线为止,保持完整乳房摘下。 首先观察网膜和各消化器官、脾、肾的自然位置和器官只见到互相关系。 肺网膜: 覆盖在肠管外面的大网膜,分深浅两层。观察位置 (浅层是由瘤胃左纵沟经腹底壁包绕过来, 链接皱胃大弯和十二脂肠。把浅层拉开,即可见到深层网膜, 深层是从瘤胃右纵沟沿瘤胃腹囊的脏面 向下达腹底壁处包绕肠管,沿浅层面转向右向上连于十二指肠与浅层相汇合, 浅层、深层网膜之间的空隙称为肉膜囊。 深层大网膜和瘤胃背囊的脏面围成网膜上隐窝, 内脏有大部分肠管和总肠系膜:隐窝向后与腹腔相通。)小网膜,起始于肝的脏面,然后包盖着瓣胃的壁面而连接到皱胃小弯和十二指肠。把小网膜拉开既看到皱胃。小肠,大肠网膜: 覆盖在肠管外面的大网膜,分深浅两层。观察位置(浅层是由瘤胃左纵沟经腹底壁包绕过来, 链接皱胃大弯和十二脂肠。把浅层拉开,即可见到深层网膜,深层是从瘤胃右纵沟沿瘤胃腹囊的脏面 向下达腹底壁处包绕肠管,沿浅层面转向右向上连于十二指肠与浅层相汇合, 浅层、深层网膜之间的空隙称为肉膜囊。 深层大网膜和瘤胃背囊的脏面围成网膜上隐窝,内脏有大部分肠管和总肠系膜:隐窝向后与腹腔相通。)小网膜,起始于肝的脏面,然后包盖着瓣胃的壁面而连接到皱胃小弯和十二指肠。把小网膜拉开既看到皱胃。小肠,大肠肝、胰、脾的观察 肝:脏面上有胆囊和肝动脉、门静脉的入口, 以及胃、食管和十二指肠的压迹。 肝的左缘钝圆,后腔静脉穿行其内。 在血管、淋巴管、神经进出的位置和称为肝门, 有淋巴结所在,肝的颜色和表面没有病变。 胰:为黄褐色,分体部、左叶和较大的右叶, 注意胰管的开处,各叶的位置。 脾:位于瘤胃背囊的左前方, 羊脾呈钝角三角形, 红紫色,脾的表面没有病变。 胃分为瘤胃、网胃、瓣胃和皱胃。 瘤胃表面有无数密集的圆锥状或叶状的瘤胃乳头。 网胃黏膜形成网格状的皱褶。 瓣胃黏膜形成许多大小不等的瓣叶。 皱胃黏膜形成螺旋形的大皱褶。 肾:红褐色,豆状,位于腰部两侧的腹膜外。 平滑单乳头肾。 (四).实验数据记录 心脏投影位和肺投影位。 四、实验要求 (一) 按照本实习指导书的指导方法和参考教材有关内容与插图,边解剖边观察,认识和掌握各器官的位置、色泽、形态、硬度和结构以及各器官之间的相互关系。 (二) 认真做好观察记录,记录要详细,必要时可以绘图或照相。 (三) 做到分工明确,各尽其责,团结互助,听从指挥,严守课堂纪律。 (四) 总结讨论,认真写好实习报告,按时缴交。 五、作业 (一)绘制羊内脏解剖图; (二)绘制羊心脏解剖图。 实验七 动物浸制标本的制作 一、实验目的:掌握浸制标本的制作方法。 二、实验原理:浸制标本是采用保存液来防腐的标本。如果保存得好,这种标本可以长期保存下去。它能清晰地显示生物体的外部形态和内部构造,还能长期保持生物体的原来色泽。 三、实验步骤: (一)准备工作 1.使用工具:解剖刀:用来解剖器官、神经和血管。剪刀:用来解剖和剪除多余的组织,制作神经标本,剪除骨骼,最好用民用剪指甲的一种阔头剪刀。镊子:用来夹取材料。解剖板(蜡盘):用来固定材料。20毫升注射器:注射防腐剂用。标本瓶或标本缸:用来盛浸制标本。大头针:标本定型用。玻璃片:插入标本瓶内,用作绑扎标本。塑料薄膜和纱布、蜡线%甲醛溶液(福尔马林)或95%酒精:用作防腐剂。:麻醉动物用。聚胺脂(马利当)粘合剂:用作标本瓶封口。石蜡:配制标本瓶封口蜡。合成樟脑:用作驱虫剂。萘:用作驱虫剂。 (二)脊椎动物标本的制作 1.防腐 动物整体标本浸制时,保存液不易渗入,时间一长,内脏容易腐败,要注入保存液防腐。可用注射器套上针头,插入草蜥的头部、胸部和腹部,各注入少量10%福尔马林。 2.整形浸制标本的固定十分重要,要细心地从头部一直做到尾部,不能遗漏。固定时解剖板或解剖蜡盘。将注射过防腐剂的草蜥,背部朝上平放在解剖板上,头颈下面衬垫一团棉絮,使头部仰抬。如果要使口张开,可在口内塞入一团棉絮。将前肢、后肢、躯干和尾部按生态摆好,用大头针固定指、趾和尾,如果标本瓶短,可将尾巴弯曲。草蜥的尾容易断,如果尾部断脱,可以用细竹丝插入,连接断尾,再整理姿态。用毛笔蘸40%福尔马林,在蜥蜴皮肤上涂遍两次。1小时以后,草蜥标本的前后肢的指,趾和尾尖部已经定形硬化,拔去大头针,取下浸在10%福尔马林里。10%福尔马林用作过渡浸液,可以浸掉草蜥体内的黄液,以免正式上瓶时污染浸液。标本要浸1~3个月,中间换新液3~4次,直到浸液不再发黄为止。 3.装瓶从10%的浸液中取出蜥蜴,用针穿好白丝线,在蜥蜴的胸部靠近前肢处和腹部靠近后肢处各穿过一条白线,将线缚在玻璃片上,在玻璃片的边缘上打结,尾部也可绑扎一条白线,使整个标本缚扎于玻璃片上,然后制做玻璃片的垫角,安装于玻璃片上,再装入已洗刷干净的标本瓶中。将标本装入瓶后再加入保存液,盖好瓶盖。瓶中的保存液不宜装得过满,液面不能接触瓶盖。取树脂胶或蜡,用毛笔蘸着填入瓶盖与瓶身的缝隙处,直到填平为止,然后,在瓶身贴上标签。 (三)保存 浸制标本不宜放在阳光直射的地方,以防瓶口封蜡溶化,浸液挥发。也不宜放置在零度以下的地方保存,防止浸液冰冻,玻璃破裂。在搬动时,不能剧烈震动,且要放置平直,以免翻倒。 实验八 显微镜的使用及血涂片的制备与观察 一、实验目的 通过本实验了解生物显微镜的构造,掌握显微镜的使用操作规程。观察牛、鸡的血液涂片,认识红细胞、各种白细胞、血小板的形态构造,并能熟练地区别各种白细胞。 二、实验要求 在了解显微镜构造的基础上,学会正确而熟练地使用及妥善地保护。认识红细胞、各种白细胞、血小板,区别各种白细胞。 三、实验原理 显微镜分机械装置部分、光学系统部分。预先熟悉各种血细胞的构造,才可能在涂片上找到,因此要求复习教科书并预习实验指导的相关内容。 四、实验材料、仪器和试剂 光学显微镜;兔、鸡的血液, 光学显微镜、Wright氏燃料甲醇溶液。 五、实验步骤或方法 (一)显微镜的使用操作 1.显微镜的构造(图1) (1)机械装置部分 镜座:在最下部,起支持作用,用以固定镜身; 镜臂:呈弓形,作支持和握取之用。 载物台:放切片的平台,中有圆孔(通光孔)。台上有推片器和片夹。 旋转盘(镜头转换器):上接镜简,下嵌接物镜,可以旋转更换物镜,转换不同倍数的物镜。 粗调节器:用于低倍镜焦距的调节,旋转时,载物台升降距离较大。 细调节器:用于高倍镜焦距的调节,旋转一周,可使镜头升或降0.1毫米。 (2)光学系统部分 接目镜:可分5×、10×或15×。装在镜筒上端,里面装有指针,常用的为10×目镜。 接物镜:可分低倍镜(10×)、高倍镜(40×)、油镜(90×或100×)。(显微镜放大倍数=目镜放大倍数×物镜放大倍数)。 聚光器:位于载物台下,可上下移动。内装虹彩光圈,可放大和缩小。 反光镜:在镜座上,可旋转,使光线集中至聚光器。有平、凹两面,平面镜反射光弱、可用于强光源;凹面反射光强,用于弱光源。 2.显微镜的使用方法 (1)携取和位置:一手握持镜臂,另一手托住镜座。放置桌面,距桌沿不得少于一寸。课间休息离开座位时,应将显微镜移向桌内,以免碰落损坏。 (2)对光:上升聚光器,放大虹彩光圈。转动旋转盘,将低倍接物镜对正载物台的圆孔,转动粗调节器使载物台距接物镜约 5毫米 。用左眼从接目镜观察,同时转动反光镜对向光源进行采光,至整个视野达到均匀明亮为止。 (3)低倍镜的使用:取标本擦净,应使盖玻片朝上,放在载物台上,用推片器夹紧,并将组织切片推移到载物台圆孔的正中。然后,以左眼从接目镜观察,同时转动粗调节器使载物台慢慢下降,至物象清晰。必要时,再用细调节器调节焦距。 (4)高倍镜的使用:先将需高倍镜观察的组织于低倍镜下移至视野正中、然后转高倍镜。再从接目镜观察,并转动细调节器,至物象清晰。 (5)油镜的使用:先在高倍镜下将需观察的组织移至视野正中,转离高倍镜。在标本上滴石蜡油一滴(勿使产生气泡)、转换油镜。两眼从侧面观察。同时慢慢上升载物台,使油镜头浸入油滴而不与玻片接触。再从接目镜观察,并转动细调节器,至物象清晰。使用油镜时,注意光线.显微镜使用的注意事项及保护 (1)搬动显微镜慎拿轻放,使用要严格遵守操作规程。 (2)观察时应同时睁开两眼。右手书写者,以左眼从接目镜观察、以右手操纵粗、细调节器。用右眼和右手配合进行绘图或文字描述。 (3)显微镜必须经常保持清洁。机械部分可用纱布或绸布擦净;光学部分(反光镜除外)只能用擦镜纸轻轻拭擦,严禁用手或其它物品擦拭、以防污损。 (4)油镜用后应立即用擦镜纸沾少量清洗剂将镜头擦净。 (5)显微镜部件不得拆卸或互相调换、若有故障,应立即报告老师进行处理,不得自行修理。 (6)显微镜用毕,应将接物镜转离载物台中央的圆孔,并上升载物台、放回原处。 (二)血涂片的制备与观察 采血: 兔心脏采血 将家兔仰卧固定,在第三肋间胸骨左缘3毫米处注射针垂直刺入心脏,血液随即进入针管。注意事项有:动作宜迅速,以缩短在心脏内的留针时间和防止血液凝固;如针头已进入心脏但抽不出血时,应将针头稍微后退一点。在胸腔内针头不应左右摆动以防止伤及心、肺 鸡心脏采血 从三角形的锁骨窝的中央部与脊椎平行方向进针,刺入心脏。 血液涂片的制备:取一小滴鲜血,立即滴在载玻片上,用另一载玻片倾斜成45度角将血液推成薄薄一层,待其干燥后,滴加Wright氏燃料甲醇溶液数滴,经固定及染色1-2分钟后,滴加等量蒸馏水与染液混合,15分钟后水洗,待干即可观察。 1.兔血涂片: 由低倍转至高倍,找血细胞类型较多的区域,观察血液中的三种有形成分——红细胞、白细胞和血小板。 1)红细胞:数量多,小而圆,为双面凹陷的盘状细胞,因此中央着色较浅,没有细胞核。 2)白细胞:慢慢移动血片,观察各种白细胞,白细胞数目虽然少,寻找较困难,但胞体大、细胞核明显,极易与红细胞区别开。 3)血小板:体积很小,形状不规则,有星状突起,血小板的边缘呈浅蓝色,中央有小蓝紫 色颗粒。血小板常成群分布在红细胞之间。 2.鸡血涂片: 制片:同家畜血涂片。重点在高倍镜下观察红细胞、嗜中性白细胞和血栓细胞(血小板)的形态结构特点。 1)红细胞 为卵圆形细胞,有胞核,呈椭圆形,内有染色质块,胞质染成淡红 2)嗜中性白细胞 由于颗粒具有多种嗜色性,故又称为异嗜性粒细胞,细胞较大,胞质内含棒状或纺锤形的红色颗粒。胞质色淡,胞核分叶情况因成熟程度而有不同,有的不分叶,有的分叶,染成淡紫色。 3)血栓细胞 是鸡血液内最小的细胞,成纺锤形。两端钝圆,常集聚成群,胞质染成浅蓝色,核呈卵圆形。注意血栓细胞与红细胞的区别,主要是体积较小,核较大,染成玫瑰紫色。 六、实验结果及数据处理(或实验图像、现象等) 绘图:显微镜的构造。 七、思考题 1. 显微镜的构造是怎样的? 2. 显微镜使用时应注意什么? 3. 高倍镜下绘图:示兔红细胞、白细胞和血小板。 实验九 四大组织的组织结构观察 一、实验目的 通过实验认识组织的种类、基本形态及构造。 二、实验要求 要求掌握上皮组织、固有结缔组织、肌肉组织、神经组织的种类及构造。 三、实验原理 复习教科书中有关内容,通过组织切片的观察,认知各类组织。 四、实验材料、仪器和试剂 光学显微镜、上皮组织、结缔组织、肌肉组织、神经组织切片。 五、实验步骤或方法 (一)上皮组织 1.单层上皮 (1)单层扁平上皮:肠系膜装片,硝酸银镀染。 间皮细胞:用高倍镜观察肠系膜上的间皮细胞,细胞排列紧密,细胞界限因镀银呈黑色,为波浪形,细胞呈扁平的多角形。 内皮细胞:用高倍镜观察肠系膜上的毛细血管,可见到内皮细胞,内皮细胞较间皮细胞小,排列紧密。 (2)单层柱状上皮:猪十二指肠横切片。 低倍镜下十二指肠横切片,可见到小肠的腔面有许多高矮不一的指状突起,这些突起是小肠绒毛的纵断面。其表面覆盖着一层柱状上皮,选择一部分排列整齐,换高倍镜观察。 在高倍镜下,柱状细胞排列紧密,细胞的高度大于宽度,细胞界限不太清晰。胞核呈椭圆形,位于细胞的基部。 (3)假复层柱状纤毛上皮:猪气管横切片。 先在低倍镜下找到气管粘膜表面的粘膜上皮,转换成高倍镜观察上皮细胞形态。这类上皮细胞因细胞核的排列高低不齐,形似复层,每个细胞的基底面部与基膜相接,故仍属于单层上皮。 (4)立方上皮: 猪或羊的甲状腺切片。高倍镜下观察甲状腺腺泡,见腺泡的上皮细胞为立方形,核为圆形,细胞界限清楚。 2.复层上皮 (1)复层扁平上皮: 猪食管横切片。 先用低倍镜找到食管的管腔,管腔面有厚薄不同的粘膜上皮,选择一部分比较薄的粘膜上皮换成高倍镜观察。 找到上皮与结缔组织交界处,可见到最基层的上皮细胞多呈矮柱状,排列较整齐,核为长椭圆形。中部的细胞为多边形,核为圆形或椭圆形,近表层的细胞逐渐变扁,呈梭形或扁平,细胞也趋于角质化,核深染、固缩。表层细胞常完全角质化,胞核消失。 (2)变移上皮: 动物膀胱横切,Bouin氏液固定,石蜡切片,HE 染色。 当膀胱处于空虚收缩状态时,上皮变厚,表层细胞呈立方形或椭圆形,体积较大,中层细胞为多边形,基底层细胞多为矮柱状或立方形。而当尿液蓄积膨胀时,变移上皮变薄,细胞形态也发生改变,表层细胞多呈扁平形。 (二)结缔组织 1.疏松结缔组织: (1)辨认细胞成分 a. 成纤维细胞:数目最多,胞体大,为多突的纺锤形或星形的扁平细胞,侧面观呈梭形。核呈卵圆形,染色质均匀分布于整个核中,可见到清楚的核仁。 b. 巨噬细胞:有吞噬能力,细胞形状不一,亦为多突起的星形细胞,注意与成纤维细胞的区别在于:细胞质中含有吞噬的台盼蓝颗粒。细胞质染色较深,细胞轮廓较明显。细胞核较小,圆形或卵圆形,染色较深,核内的结构看不清。 c. 肥大细胞:细胞常成堆或单个分布于血管附近。细胞呈圆形或卵圆形,细胞质中充满大小一致、染成蓝紫色的颗粒,均匀分布在核周围。细胞核小,呈圆形或椭圆形,染色浅,位于细胞中央。 d. 浆细胞:较小,椭圆形。胞核偏向一侧,核中的染色质排列成车轮状。近核处的胞质中有一淡染区。胞质嗜碱性,染为蓝色。 (2)观察纤维 a. 胶原纤维被伊红染成粉红色,为粗细不等的束状结构,交叉排列,有的较直或呈波浪形,其中的原纤维大多看不清。 b. 弹性纤维染成蓝紫色,单条分布而不成束,纤维粗细不等,有分支,并交织成网。 2.致密结缔组织 取动物的腱,纵切,苏木素——伊红染色。腱为规则致密结缔组织,显微镜下看到腱由许多平行而紧密排列的胶原纤维束(染成鲜红色)和腱细胞(蓝染)构成。切面上呈长梭形,核椭圆形或肝状。 3.网状组织 观察镀银的淋巴结。 网状纤维:镀染成黑色,粗细不等,彼此结合成网状。 网状细胞:呈多角形与邻近细胞的突起相连。突起与纤维方向平行。 4.脂肪组织 脂肪组织主要由脂肪细胞组成。脂肪细胞质内充满脂肪滴,胞质位于细胞边缘成一薄层,核亦被挤到细胞的边缘,压成扁形。 (三)肌肉组织 1.平滑肌: 用高倍镜观察小肠壁的肌层(猪十二指肠横切面。H.E染色)。 肌层有两层,即内环肌层及外纵肌层,在内环肌层可见到梭形的平滑肌细胞(因是切片,看不到完整的细胞),注意细胞的排列。细胞间有疏松结缔组织。 2.骨骼肌: 制片:取家畜舌肌或缝匠肌纵、横切面,H.E染色。 观察骨骼肌的纵切面。低倍镜下,肌纤维呈带状,选择染色较均匀的部分观察,看到呈带状的肌纤维具有明暗相间的明带和暗带,肌纤维表面有肌膜。肌膜下方有多个染成深蓝色的长卵圆形核。肌纤维之间有染色较淡的结缔组织。 用高倍镜观察,肌纤维内有纵行排列的肌原纤维,肌原纤维相互排列紧密,每条肌原纤维都具有特殊的横纹,构成肌纤维交替相间的明带(I带)和暗带(A带)。暗带染色深,明带染色浅,选择较清楚的部分在油镜下观察。在明带中心有一条暗线,称间线(Z线)。在暗带中有一条明亮的小带称H带,在H带正中间有M线。相邻的两Z线之间的一段距离称肌节,是横纹肌的机能单位。 观察骨骼肌的横切面。肌纤维呈圆形或多角形,胞核位于纤维的边缘。肌原纤维呈红点状,在肌纤维外面有少量的结缔组织称肌内膜。很多肌纤维又被肌束膜包围形成肌束。 3.心肌 家畜心室壁纵切面,HE染色。 心肌纤维有分支,各纤维以分支相连。纤维中部有椭圆形的核,也有横纹,但不规则。 在心肌纤维中,能看到有横过纤维染色较深的线,称闰盘,是两个心肌纤维连接处。 在心内膜下方有蒲金野氏纤维,为心肌特化的传导纤维。注意它较心肌纤维粗大,核也大,位于中央,可有两个核;肌浆丰富,肌原纤维较少,多分布于细胞周围。 (四)神经组织 1.神经细胞 观察:在切片上神经细胞呈三角形或多角形,细胞周围有突起。树突多在细胞体近处有分支,基部呈圆锥形,末端变细。轴突比树突粗,不分支,轴突全长粗细基本相等,无尼氏体,在轴突的起始部与胞体相连的部分也不含尼氏体称轴丘。 2.有髓神经纤维: 观察:在低倍镜下可看到神经纤维平行排列成束,高倍镜观察下在每条神经纤维的中央,有一条兰紫色的细线即轴突,轴突外围包有髓鞘,外面是薄层呈红色的雪旺氏细胞膜,紧靠膜的内侧有杆状的神经膜细胞核即雪旺氏细胞核,神经纤维每隔一定距离有一环状的缩细部称郎飞氏结,此处髓鞘中断,雪旺氏细胞膜直接与轴突相贴。 六、实验结果及数据处理 七、思考题 1、高倍镜下绘图:表示一部分单层柱上皮,注解:柱状细胞、纹状缘、基膜、杯状细胞。 2、高倍镜下绘图:示一、二条肌纤维。注解:明带、暗带、Z线、肌节、细胞核、H带。 3、高倍镜绘图:示有髓神经纤维一段。注解:轴突、髓鞘、神经膜、雪旺氏细胞核、郎飞氏结。 实验十 肾脏、淋巴结和脾脏的组织结构观察 一、实验目的 观察淋巴结、脾脏、肾脏的组织结构,认识不同特点,并联系其结构理解功能。 二、实验要求 通过观察淋巴结、脾脏、肾脏的组织结构,认识初级淋巴器官和次级淋巴器官的不同特点,并联系其结构理解淋巴器官系统的功能。 三、实验原理 复习教科书中有关内容,通过组织切片的观察,认知淋巴器官系统。 四、实验材料、仪器和试剂 光学显微镜、淋巴结、脾脏、肾脏的切片 五、实验步骤或方法 (一)淋巴结 切片:牛淋巴结,HE染色。 低倍镜下观察,淋巴结可分为被膜、皮质和髓质三部分。 被膜:由比较致密的结缔组织构成,被膜伸入淋巴结内形成小梁。被膜和小梁均染成淡红色。 皮质:在皮质浅层可见到呈圆形或椭圆形的淋巴小结。淋巴小结的细胞属于B淋巴细胞。 副皮质区位于淋巴小结和髓质之间,有大量散在的淋巴细胞,细胞大小不一,该区细胞主要是T淋巴细胞。 髓质:位于淋巴结的中央部分,由髓索和髓窦组成。髓索为淋巴组织索,与副皮质区相连。髓索内有淋巴细胞、浆细胞和巨噬细胞等。髓窦位于髓索之间,与皮质淋巴窦相通。 (二)脾脏 切片:猪脾脏,HE染色。 低倍镜下观察,脾脏表面有被膜包裹,伸入脾内,构成小梁。实质部可见一团团的淋巴组织,称为白髓,白髓周围的淋巴组织及血窦均属于红髓。 高倍镜下观察,白髓由淋巴小结和动脉周围淋巴鞘两部分构成。 (三)肾脏 切片:猪肾切片,HE染色。 低倍镜下观察,肾脏表面是被膜,皮质内可见三种结构:肾小体、近端小管曲部和远端小管曲部。髓质为纵向或横断的肾小管,包括集合管、近端小管直部、远端小管直部、细段以及乳头管。 高倍镜下观察: 肾小体:由肾小球和肾小囊组成。 近端小管曲部:染成深红色,管壁上皮细胞呈锥体状,细胞间界限不清。 远端小管曲部:胞质染色较淡,呈立方形或低柱状,细胞分界清楚,核圆形,位于中央,管腔较大。 细段:上皮为扁平细胞,3-4个细胞围成一个管腔。 集合管:管壁细胞由立方上皮移行为柱状上皮,细胞界限清楚,胞质染色较淡,核圆形,居中。 乳头管:管壁由高柱状细胞移行为复层柱状细胞,在肾乳头开口处逐渐转为变移上皮。 六、实验结果及数据处理(或实验图像、现象等) 七、思考题 1.绘低倍镜的脾脏图,标注下列结构: 1.被膜;2.小梁;3.白髓;4.中央动脉;5.红髓。 2.绘图:高倍镜下示淋巴结皮质或髓质 注释:1.被膜;2.小梁;3.皮质;4.淋巴小结;5.皮质淋巴窦;6.副皮质区;7.帽; 8.亮区;9.暗区;10.髓索;11. 髓质淋巴窦。 3. 绘低倍镜的胸腺图,标注下列结构:胸腺小叶、胸腺皮质、髓质、淋巴细胞、巨噬细胞。 实验十一 红细胞脆性实验 一、实验目的 通过学习测定红细胞渗透脆性的方法,理解细胞外液渗透张力对维持细胞正常形态与功能的重要性。 二、实验原理 正常的红细胞系混悬于等渗的血浆中,若置于高渗溶液内,则红细胞失去内部液体而皱缩;反之,置于低渗溶液内,则水分进入红细胞,使红细胞两面凹陷的圆盘型变为球型,如继续膨大,即发生破裂溶解,形成溶血。 红细胞脆性试验就是测定红细胞对低于0.9%NaCl溶液的耐受能力。耐受力高者,红细胞不易破裂,即脆性低。反之,耐受力低者,红细胞易于破裂,即脆性高。 凡上层液开始微呈淡红色,而极大部分红细胞下沉,称开始溶血或最小抗力(红细胞的最小抗力)。凡液体呈均匀红色,管底无红细胞下沉,称完全溶血或最大抗力(红细胞的最大抵抗力)。 三、实验材料 动物新鲜血液(动物种类不限)、1%肝素等抗凝剂、蒸馏水、1%NaCl (一组需要10 ml);试管,试管架,2ml刻度吸管、离心机、胶头滴管等。 四、实验步骤或方法 溶液配制:先将试管分别排列在试管架上,按下列表把1%NaCl稀释成不同浓度的低渗溶液,每管溶液均为2毫升。 制备抗凝血 采取血液,加入抗凝剂(1%肝素0.1 ml可抗10 ml血)。 加抗凝血: 在上列各管中加入大小相等的血液1滴,然后,用拇指堵住试管口,将试管慢慢倒置一、二次,动作要轻,使血液与管内盐水混合均匀。 3000r/min,离心10分钟(或者静置2小时)。注意加血液时不要用力挤压,勿将泡沫挤入试管。 观察结果:根据各管中液体颜色和浑浊度的不同,判断红细胞脆性(以白色为背景)。 未发生溶血的试管:液体下层为大量红细胞沉淀,上层为无色透明,表明无红细胞破裂。 部分红细胞溶血的试管:液体下层为红细胞沉淀,上层开始出现透明淡红色,表明部分红细胞已经破裂,称为开始溶血或最小抗力、最大渗透脆性。 红细胞全部溶血的试管:液体完全变成透明红色,管底无红细胞沉淀,表明红细胞完全破裂,称为完全溶血或最大抗力、最小渗透脆性。 试管号 稀释度 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1%氯化钠 1.40 1.30 1.20 1.10 1.00 0.90 0.80 0.70 0.60 0.50 蒸馏水(毫升) 0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40 1.50 氯化钠浓度(%) 0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 五、实验结果及数据处理 报告该实验动物红细胞的最小渗透抵抗力和最大渗透抵抗力。 讨论如何通过渗透脆性特征判断机体的健康状况。 六、注意事项 红细胞脆性测定时,小试管要干燥,加抗凝血的量要一致,只加一滴。 混匀时,轻轻倾倒1~2次,减少机械震动,避免人为溶血。抗凝剂最好为肝素,其他抗凝剂可改变溶液的渗透性。 配制不同浓度的NaCl溶液时应力求准确、无误。 NaCl溶液的浓度梯度可根据动物的实际情况适当进行调整。 七、思考题 1.红细胞的形态与生理特征有何关系? 2.红细胞脆性结果的临床意义? 实验十二 血红蛋白含量的测定 一、实验目的 掌握用比色法测定动物的血红蛋白含量。 二、实验原理 血红蛋白浓度,又名血红蛋白含量(简写Hb)指每升全血中红细胞的血红蛋白的含量,单位为g/L。血红蛋白为血液携带氧气的运载工具,故此值可用于衡量贫血的程度。 血红蛋白含量测定原理:测定血红蛋白的方法较多,实验常用比色法。其原理是血红蛋白的颜色常与氧的结合量多少有关。但当用一定的氧化剂将其氧化时,可使其转变为稳定、棕色的高铁血红蛋白,而且颜色与血红蛋白(或高铁血红蛋白)的浓度成正比。在一定量的血液中加入一定量的稀盐酸,血红蛋白与盐酸作用后,能使亚铁血红素变成高铁血红素,呈现较稳定的棕色。用水稀释后与标准比色板比较,可求出每100ml血液中所含的血红蛋白克数。 三、实验材料 动物新鲜血液 不抗凝(动物种类不限)、血红蛋白计(标准比色架、血红蛋白稀释管)、玻棒、血红蛋白吸管、滴管、采血针、1/10N盐酸、酒精棉球、脱脂棉球、蒸馏水、注射器等。 四、实验步骤或方法 实验前先检查血红蛋白吸管和测定管是否清洁,如不清洁要洗涤干净,然后方可开始试验。 用滴管将1/10N盐酸加入测定管中至刻度“2”或“10%”处 用酒精棉球消毒动物的采血部位,待其干燥后,用消毒过的采血针刺破血管,使血液流出,第一滴血弃去不要,待第二滴血流出时,用血红蛋白吸管的尖端接触血滴,吸血至刻度20mm3(ul)处。由于血红蛋白细管操作容易出问题,本实验做一个改进试验一下,用移液器吸取20微升血液3.用滤纸片或干棉球擦干吸管周围的血液,将吸管立即插入血红蛋白稀释管的盐酸内,将血液轻轻吹出。然后再反复吸吹几次,使吸血管壁上的血液全部进入测定管中。在进行吸吹时,要注意避免起泡。用玻璃棒将测定管中的盐酸与血液混合,放置10分钟。 把稀释管插入比色架中,使无刻度的两侧面位于空格的前后方,便于比色。 以蒸馏水逐滴加入测定管中,每次加蒸馏水后,都要摇均;再插入比色箱中进行比色。这样,测定管中的颜色逐渐变淡,直至与比色箱中的标准比色板相同时为止。 用从比色箱中取出测定管,读出其中液体表面的刻度。该管一般两边皆有刻度,其一边的刻度表示克数;如液体表面在刻度15处,即表示100毫升血液中含有15克血红蛋白;其另一边的刻度,表示百分率,它与克数之间的关系,通常100%相当有于14.5克;例如液体表面在刻度70%处,要计算其绝对克数,可用下列比例式求得:x:14.5=70:100 x=10.15(克) 五、实验结果 报告实验动物的血红蛋白含量。 六、注意事项: 血红蛋白含量测定时,血液与盐酸作用时间不可少于10分钟,否则血红蛋白不能充分转变成高铁血红蛋白,使结果偏低。比色时应将玻棒取出,而且最好在自然光下,而不应在黄色光下进行,以免影响结果。整个实验过程中均应注意避免起泡。 七、思考题 血红蛋白的含量与年龄的关系? 影响血红蛋白含量的主要因素? 测定结果是否在动物血红蛋白含量的正常的范围内?如果没有,原因有那些? 实验十三 心率和脉搏的测定 一、实验目的 学习和掌握心率和脉搏的测定方法。理解和掌握神经递质与受体的作用机理。 二、实验原理 心脏的跳动产生心音。心脏每收缩舒张各一次,产生两个心音,即第一心音(心缩音),发生在心缩期的开始,主要由心室收缩时三尖瓣和二尖瓣关闭以及射血开始引起的主动脉管壁的震动;第二音(室舒音),发生在心舒期的开始,主要由心室舒张时半月瓣关闭,血液冲击瓣膜以及主动脉中血液减速等引起的振动。每分钟心跳的次数称为心跳频率,简称心率。通过听取心音来确定。 随着心脏的跳动和动脉血间断的被射入动脉,近心处大动脉表现扩缩形成起伏波,此起伏波沿动脉管壁迅速外传,外周动脉即表现出周期性的起伏波动,即为脉搏。用手指在较大的浅层动脉处能触摸到。常在股动脉处摸出。 植物神经的副交感神经节后纤维所释放的乙酰胆碱的作用,与毒蕈碱的药理作用相同,称为毒蕈碱样作用(M样作用)。凡是能与乙酰胆碱结合的受体叫做胆碱能受体,包括M受体和N受体。 大多数副交感神经节后纤维和少数交感节后纤维(引起汗腺分泌和骨骼肌血管舒张的舒血管纤维)所支配的效应器上的胆碱能受体都是M受体。当M受体与乙酰胆碱结合时,则产生毒蕈碱样作用,也就是使心脏活动受抑制、支气管平滑肌收缩、胃肠运动加强、膀胱壁收缩、瞳孔括约肌收缩、消化腺及小汗腺分泌增加等。阿托品可与M受体结合,阻断乙酰胆碱的毒蕈碱样作用。 阿托品是从颠茄和其他茄科植物提取出的一种有毒的白色结晶状生物碱。阿托品:阻断M胆碱受体的抗胆碱药,能解除平滑肌的痉挛(包括解除血管痉挛,改善微血管循环);抑制腺体分泌;解除迷走神经对心脏的抑制,使心跳加快;散大瞳孔,使眼压升高;兴奋呼吸中枢。 三、实验材料 家兔、听诊器、氯化氨甲酰甲胆碱注射液、阿托品、酒精棉球、剪毛剪、1ml注射器、秤 四、实验步骤或方法 测定正常动物心率。将家兔保定后,使其尽可能的保持安静,在左侧肘突内侧3-6肋间或右侧肘突内侧2-5肋间心音明显处听诊心音,依心音变化测定每分钟的心跳次数。 将家兔保定后,使其尽可能的保持安静,在股动脉处测定动物的脉搏。 耳缘静脉注射或肌肉注射M受体激动剂氯化氨甲酰甲胆碱注射液后观察动物的心率、脉搏、瞳孔的变化。 半小时后再注射阿托品,观察动物的心率、脉搏、瞳孔的变化。 五、实验结果 记录正常家兔的心率和脉搏、注射毛果芸香碱和阿托品后观察动物心率、脉搏、瞳孔的变化并做好记录。 六、注意事项 根据动物的体重确药品的使用剂量,并严格掌握。 听诊器耳端应与外耳道方向一致,橡皮管不可交叉扭结,不可与其他物摩擦。 七、思考题 M样受体激动剂有哪些? 实验十四 动物体温的测定 一、实验目的 学习并掌握动物体温的测定方法,了解一些因素对体温的影响及其调节。 二、实验原理 体温指的是机体深部(胸腔、腹腔)的温度,是机体在代谢过程中不断产生热能的结果。对于恒温动物,体温在一定的外界温度条件下可保持相对恒定。恒定的体温是机体在代谢过程中产热和散热动态平衡的结果。体内温度的来源是体内物质代谢过程中所释放出来的热量。正是由于机体在代谢过程中不断有热能的释放,才能保证有机体新陈代谢的正常进行。 由于深部温度,特别是血液温度不易测试,在生理学和畜牧兽医实践中,多以直肠温度代表体温。 剧烈运动时,因肌肉使主要的产热器官,可使体温一时升高。 甲状腺激素是由甲状腺分泌的含碘化合物,这种激素能加速细胞内的氧化过程,促进分解代谢,产热量增加。肾上腺素是肾上腺髓质分泌的胺类激素,其主要作用为促进糖和脂肪的分解代谢,促使产热增加。 三、实验材料 家兔、体温计、 1ml注射器,剪毛剪,酒精棉球、肾上腺素、秤等。 四、实验步骤或方法 将家兔保定好,并确保人畜安全,称重记录。 用酒精棉球消毒体温计,然后利用手腕力量,先将水银柱刻度甩到35以下,然后顺直肠方向捻转缓慢将体温计插入直肠,插入深度为体温计长度的1/2—4/5,体温计另一端经栓系的铁夹向前夹持于被毛上,以防滑脱。测定时间3-5分钟。 体温计取出读数,记录,读数后体温计消毒备用。 注射肾上腺素,约30分钟后,测定直肠温度。 五、实验结果及数据处理 分别记录正常条件下、注射甲状腺激素和注射肾上腺素后动物体温的数值,比较试验结果并进行分析。 六、注意事项 测定的方法和部位力求准确,插入直肠的深度要适宜,测定时间应一致。 体温计插入直肠前,应先涂抹适量的凡士林,尽量避免损伤直肠黏膜。 严格控制并准确吸取注射药物的剂量 七、思考题 为什么一般以动物的直肠温度作为体温? 测定时为何要求插入直肠的深度要适宜,测定时间应一致? 影响体温调节的因素有哪些、调节机理是什么? 实验十五 胰岛素与肾上腺素对血糖的影响 一、实验目的 了解胰岛素、肾上腺素对血糖的影响。 二、实验原理 血糖含量主要受激素的调节。胰岛素使血糖浓度降低,肾上腺素可使血糖浓度升高。通过对实验动物注射适量的胰岛素,来观察低血糖症状的出现,然后注射适量肾上腺素,可见低血糖症状消失,从而了解胰岛素和肾上腺素对血糖的影响。 三、实验材料 小白鼠、0.1%肾上腺素、20%葡萄糖溶液、生理盐水、注射器、针头、恒温水浴锅等。 四、实验步骤或方法 实验准备 取禁食24 h的小白鼠4只,称重后分别编号,1只为对照小鼠(C),3只为实验小鼠 实验项目 (1) 给3只试验小鼠分别皮下注射按1~2 U的胰岛素,对照鼠同法注入等量生理盐水。观察小鼠反应,并记录各小鼠有无不安、呼吸急促、痉挛、甚至休克等低血糖反应。 (2) 待试验小鼠出现低血糖症状后,立即1只腹腔(或尾静脉)注射20%葡萄糖溶液1 ml,一只皮下(或尾静脉)注射0.1%肾上腺素0.1 ml,1只腹腔(或尾静脉)注射1 ml生理盐水作对照,观察并详细记录实验结果。 五、实验结果及数据处理 详细记录实验结果并深入分析讨论。 六、注意事项 实验动物在实验前须禁食24小时以上。 腹部皮下注射,以45°进针,针头不要刺入腹腔,更不要穿破皮肤注射到体外。 七、思考题 调节血糖的激素主要有哪些? 各有何生理功能? 影响这些激素分泌的主要因素是什么? 实验十六 脊髓反射 (选修) 一、实验目的 通过对脊蛙的屈肌反射的分析,探讨反射弧的完整性与反射活动的关系; 学习掌握反射时的测定方法,了解刺激强度和反射时的关系; 二、实验原理 在中枢神经系统的参与下,机体对刺激所产生的适应反应过程称为反射。较复杂的反射需要由中枢神经系统较高级的部位整合才能完成,较简单的反射只需通过中枢神经系统较低级的部位就能完成。将动物的高位中枢切除,仅保留脊髓的动物称为脊动物。此时动物产生的各种反射活动为单纯的脊髓反射。由于脊髓已失去了高级中枢的正常调控,所以反射活动比较简单,便于观察和分析反射过程的某些特征。 反射活动的结构基础是反射弧。典型的反射弧由感受器、传入神经、神经中枢、传出神经和效应器五个部分组成。引起反射的首要条件是反射弧必须保持完整性。反射弧任何一个环节的解剖结构或生理完整性一旦受到破坏,反射活动就无法实现。 完成一个反射所需要的时间称为反射时。反射时除与刺激强度有关外,反射时的长短与反射弧在中枢交换神经元的多少及有无中枢抑制存在有关。由于中间神经元连结的方式不同,反射活动的范围和持续时间,反射形成难易程度都不一样。 三、实验材料、仪器和试剂 蟾蜍或蛙、硫酸溶液(0.1%、0.3%、0.5%、1%)、1%可卡因或普鲁卡因。蛙类手术器械、铁支柱、玻璃平皿、烧杯(500 ml)、小滤纸(约1 cm×1 cm)、纱布、秒表。 四、实验步骤或方法 实验准备:自蛙的枕骨大孔插入探针,破坏脑(或用剪刀从口角伸入,于枕骨大孔处剪断蛙头),然后用线穿过下颌,将蛙悬起,进行下面的实验。 脊髓反射活动的特征:(1)屈肌和伸肌反射:以盛有0.5%硫酸的小烧杯,将蛙的后肢浸入硫酸中,可见到屈肌反射,而未刺激的后肢则伸直。 (2)搔扒反射:以浸有0.5%硫酸的小片滤纸贴于蛙的腹侧部,可见其同侧后肢抬起,向受刺激的部位搔扒。 兴奋在中枢神经系统内的传导特征:(1)反射时的测定:依前法用0.25%及1%的硫酸刺激脚趾,测定反射时。每种浓度重复三次,求其平均值。每次浸入蛙趾的部位及深度应相同,以免因刺激强弱不同而影响实验结果。试比较刺激强度与反射时的关系。(2)反射作用的抑制:先用小镊子夹住蛙大腿根部的皮肤,待蛙不活动后,再将后肢浸入0.25%的硫酸中,重复三次,求其反射时的平均值,并与前一实验相比较,是否有变化? 脊髓内兴奋过程的扩散:用镊子轻夹蛙左趾时,仅左肢动;加强力量时,两后肢均动;力量更强时,全身都动。 脊髓在维持肌紧张中的作用:实验蛙的四肢一直处于某种程度的屈曲状态,这说明肌肉处于某种程度的紧张状态。若用探针将脊髓破坏后,则不再屈曲,肌肉松弛,四肢完全下垂。 五、实验结果及数据处理 描述各项实验结果,探讨形成的机制。 有反射活动时的反射弧的组成。 六、注意事项 注意使用硫酸的安全性 在测反射时时,有可能出现H2SO4的浓度低,反而反射时短。随着实验进程,标本产生了适应性,反应灵敏性下降,因此浓度增加,反射时有可能增加。标本本身兴奋性就很低。 七、思考题 简述反射时与刺激强度之间的关系。 右侧坐骨神经被剪断后,动物的反射活动发生了什么变化?这是损伤了反射弧的哪一部分? 剥去趾关节以下皮肤后,不再出现原有的反射活动,为什么? 第二部分 动物医学基础实验 实验一 局部血液循环障碍 一、实验目的 掌握淤血,出血,充血,梗死,血栓的形态特点及镜下病变。 了解上述各种局部血液循环障碍出现在各主要器官时对机体的影响。 二、实验要求 观察病理切片,并绘图。 三、实验材料、仪器和试剂 病理组织切片机、显微镜、水浴锅、烘干箱、移液器,生物组织包埋机,生物组织摊片烤片机,烘片机,自动组织脱水机等。 四、实验内容 切片观察 1.慢性肝淤血 低倍:肝小叶结构可辨认,小叶中央静脉及邻近的肝窦扩张,某些区域小叶中央静脉可见大量红细胞,肝细胞索变细或消失。偶见肝局灶性坏死。 高倍:许多区域肝细胞索结构消失,肝细胞核溶解,消失。某些区域肝细胞胞浆浑浊,内充满大量淡红色颗粒状物质(颗粒变性)。 2. 急性肝淤血 低倍:肝小叶结构可辨认,小叶中央静脉及邻近的肝窦扩张,内部充满红细胞。肝细胞索清洗,结构完整。 高倍:可见中央静脉和肝窦扩张,充满红细胞,肝细胞可见胞浆浑浊,可见颗粒变性。 3. 急性肾淤血 低倍:肾小球、肾小管清晰可见,局部出现血管扩张,内充满红细胞。 高倍:肾小球内毛细血管扩张,充满红细胞;肾小管间血管扩张,充满红细胞。 4. 急性肺淤血 低倍:细支气管、肺泡清洗可见,肺泡壁毛细血管扩张,充满红细胞,肺泡内液体渗出;血管扩张,充满红细胞。 高倍:肺泡壁毛细血管扩张,充满红细胞,肺泡内浆液性性渗出,可见单核细胞。 五、思考题 1. 任绘一种病变及描述 2.淤血与出血的主要区别是什么? 实验二 局部组织和细胞损伤病变 一、实验目的 掌握颗粒变性、脂肪变性、淀粉样变、萎缩、坏死的镜下病变,并了解他们对机体所产生的影响。 二、实验要求 观察病理切片,并绘图。 三、实验材料、仪器和试剂 病理组织切片机、显微镜、水浴锅、烘干箱、移液器,生物组织包埋机,生物组织摊片烤片机,烘片机,自动组织脱水机等。 四、 实验内容 切片观察 1.肝脂变 低倍:肝小叶结构可辨认,但境界不清,小叶中心部呈放射状排列,周边的肝细胞排列不规则,并出现大小不等的空泡(脂肪滴)。 高倍:大小不等的空泡位于肝细胞浆内,胞核被挤与细胞的边缘或整个细胞呈一大空泡。 2. 肾贫血性梗死 低倍:肾小球、肾小管清洗可见,区域性存在肾小球、肾小管内皮细胞细胞核消失。 高倍:梗死区肾小管内皮细胞细胞核溶解消失,肾小管为均质红染。 3. 肺出血性梗死 低倍:正常区肺泡、细支气管清晰可见,梗死区大量红细胞弥漫存在。 高倍:梗死区内弥漫充满红细胞,肺泡壁细胞核溶解消失。 五、思考题 1. 任绘一种病变及描述 2.脂肪变形的大体病变及显微病变特点是什么? 实验三 炎症 一、实验目的 掌握增生性炎,变质性炎,渗出性炎在显微镜下的病变特点,并了解几种炎症对机体的影响。 二、实验要求 观察病理切片,并绘图。 三、实验材料、仪器和试剂 病理组织切片机、显微镜、水浴锅、烘干箱、移液器,生物组织包埋机,生物组织摊片烤片机,烘片机,自动组织脱水机等。 四、实验内容 切片观察 1.渗出性炎(纤维素性胸膜炎) 低倍:肺胸膜表面增厚(此为渗出物),渗出物与胸膜交接处有一细胞浸润带,胸膜下血管充血,组织疏松,充有很多丝状渗出物,并且可见有大小不等的高度扩张的淋巴管,肺泡壁的毛细血管高度扩张充血。 2.增生性淋巴结炎(特殊增生) 低倍:淋巴结的组织结构较为清楚,皮质部淋巴小结部分尚可分清,生发中心比正常淋巴小结的生发中心大,在有些区域出现不整齐的透明区,髓质部结构尚可完整。 高倍:淋巴小结内充满有多量的上皮样细胞,生发中心非常明显,其中淋巴细胞显著减少,其它不整齐的透明部分也是由上皮样细胞组成。 3.变质性炎(肾) 低倍:肾组织的轮廓尚清楚,肾小管管腔明显变大,管壁变薄,间质内有多种的细胞。 高倍:肾小管的大多数上皮细胞核消失,胞浆散在于管腔(此为肾小管上皮细胞坏死的形态学表现)间质内增多的细胞主要是淋巴细胞,红细胞等。 五、思考题 1.任绘一种病变及描述。 2.炎症细胞的种类及主要形态是什么? 实验四 肿瘤 一、实验目的 掌握良性肿瘤和恶性肿瘤在显微镜下的病变特点,并了解它们的生长方式,扩散途径等区别要点。 二、实验要求 观察病理切片,并绘图。 三、实验材料、仪器和试剂 病理组织切片机、显微镜、水浴锅、烘干箱、移液器,生物组织包埋机,生物组织摊片烤片机,烘片机,自动组织脱水机等。 四、实验内容 1. 脂肪瘤 低倍:看到许多空泡,大小不一,排列杂乱无章。 高倍:看到大小不等的空泡,急性差,肿瘤间质少,瘤细胞被结缔组织分成许多小叶。 2. 马立克氏病心肌切片 低倍:在心肌纤维之间可见许多淋巴样细胞,心肌纤维萎缩变细。 高倍:心肌纤维间可见大小不等的淋巴样细胞,心肌纤维变性,异染性增强,个别部位可见心肌纤维断裂。 五、思考题 1.任绘一种病变及描述。 实验五 动物病理组织切片制作 病理切片制作技术是生物学技术的一部分,它是一门应用科学。近年来,在畜牧兽医工作中,对病理切片技术的应用越来越广泛,如在尸体剖检、畜禽的肿瘤、种种药物对动物的毒性试验等工作,除了常规的肉眼检查外,为了明确病变性质,就必须进一步作病理组织学检查。因此,掌握这方面的方法,对教学、检验和科研工作来说,都是必须具备的基本技能。 一、实验目的 掌握制片的一般过程及原理,掌握病理组织的取材、固定、脱水、透明、透蜡、包理、切片、附片、烤干、染色、封固等细节,掌握苏木素—伊红(Hematoxylin-Eosin H.E)染色方法。 二、实验要求 提起预习,熟悉实验步骤。 三、实验材料、仪器和试剂 病理组织切片机、显微镜、水浴锅、烘干箱、移液器,生物组织包埋机,生物组织摊片烤片机,烘片机,自动组织脱水机等。 四、实验步骤 (一)取材 镜检标本的选择非常重要,不能随意切取,最好由解剖者本人切取。在切取镜检标本时,应注意下列几个方面。 1.病理组织应尽早固定,越新鲜越好,以免死后变化。组织固定前,切勿摸、挤、压、拉等,这样都会改变组织的原有性状,切取组织块要用锋利的刀片切割。 2.取材时,必须选择正常组织与病灶交界处的组织,切片材料要一式二份。 3.切取组织块的大小为1.5×1.5×0.5厘米,如做快速切片,则厚度不能超过0.2厘米。 4.切取的组织块应包括各个器官的主要构造,例如肾组织应包括皮质、髓质,肝、脾等组织应连有被膜。 5.切取肿瘤标本时不应在肿瘤中心坏死区或感染处采取材料,以免结构不清,妨碍诊断。应当在肿瘤实质部的边缘处垂直切取,一般从外到里,采取2—3块组织。注意不要挤压标本,以免组织变形,影响诊断。 6.组织块固定时,不要弯曲扭转。肠壁、胆囊壁等,可先行平放在硬纸片上,然后慢慢放入固定液中。 7.采取的组织块必须用铅笔注明号码。如组织块要作长期保存,于10%福尔马林溶液中固定24—48小时后,用清水冲洗片刻再放入新鲜福尔马林溶液中保存。 (二)固定 采取的病理材料必须立即放入固定液中,这样,细胞迅速死亡,能够保存细胞原有的形状和构造。固定组织所用的固定液不能太少,一般应为组织块体积的10倍,否则会影响切片的质量和诊断。 现介绍几种常用的混合固定液。 1.甲醛固定液(10%中性福尔马林) 福尔马林 100毫升 蒸馏水 900毫升 磷酸二氢钠 4克 磷酸氢二钠 6.5 克 2.酒精福尔马林液(A.F.A) 酒精(95%) 85毫升 福尔马林(40%甲醛水溶液)10毫升 冰醋酸 5毫升 这种固定液,同时具有固定和脱水作用,多数用于病理检验的切片,从固定液取出的组织块,可以直接浸入95%酒精或无水酒精,不需要用水冲洗。 3.鲍因氏液(Bouin氏液) 苦味酸饱和水溶液 75毫升 福尔马林(10%) 25毫升 冰醋酸 5毫升 这是常用的固定液,穿透速度快,固定均匀,固定皮肤更为合适(因为苦味酸有软化皮肤的作用)。鲍因氏液固定后,组织着黄色,用饱和碳酸锂水溶液洗数次,黄色即可褪掉。 4.卡诺氏液(Carnoy氏液) 无水酒精 60毫升 氯仿 30毫升 冰醋酸 10毫升 这是渗透力最强的一种固定液,固定的组织切片适合各种染色法,新鲜标本固定1—2小时。固定细胞分裂的组织更为合适,固定后用95%酒精洗涤。 (三)水洗、脱水 组织脱水前,必须用流水洗去固定液。组织经固定和水洗后,组织中含有多量水分。这时还不能浸石蜡包理,因为水不能与石蜡混合。必须先把组织内有水分除去,便于透明剂浸入。但脱水剂必须是与水在任何比率下均能混和的液体,脱水剂兼有硬化组织的作用。最常用的脱水剂为酒精、丙酮等。 1.酒精 是最常用的脱水剂。组织经固定及冲洗后,再经过一系列由低浓度到高浓度的酒精,逐渐脱净组织中的水分。脱水的程序为50%→70%→80%→95%→100%。各级酒精2—4小时,视材料的大小、厚薄而定。脱水过程要逐级进行,不能操之过急,否则会引起组织块强烈收缩变形。无水酒精要用两瓶,组织经两次酒精处理。100%酒精有硬化组织的作用,时间不宜太长,一般不超过3小时。坚韧的组织如骨、韧带、肌肉等,时间不能过长,约2小时左右。脑组织、脂肪组织或疏松结缔组织,脱水时间要适当延长。 2.丙酮 其作用一般与酒精相同,但它的脱水力与收缩力比酒精强。为了避免组织过度收缩要先经过低浓度丙酮(40%丙酮),再放入纯丙酮中,每级浸1小时。快速石蜡切片,用丙酮脱水,效果较好。 (四)透明 透明对组织有脱酒精及透明两种作用,具有这种作用的试剂称为透明剂。透明剂不仅有脱酒精的功能,而且能溶解于石蜡,便于石蜡渗入。常用的透明剂有二甲苯、松油醇、香柏油。 1.二甲苯 是最常用的良好透明剂,不影响各种染色。二甲苯易溶于酒精,能溶解石蜡,也是封固剂,不吸收水,透明力强。但组织不能放置过久,放置时间视组织块的大小而定,通常为半小时左右,否则组织容易变脆。为了避免组织剧烈扭转与收缩,最好在投入二甲苯透明前,先经过二甲苯与无水酒精11混合液。 2.松油醇 是兼有脱水作用的透明剂。吸水力强,优于其他透明剂。组织块经过各级酒精,脱水至95%酒精时,取出组织块移浸松油醇时,即能透明(不需要经过无水酒精、二甲苯)。组织块放在松油醇中,可放置过夜。经松油醇透明的组织块穿透力弱,浸蜡时间要适当延长。 3.香柏油 香柏油对组织收缩及硬化的程度比其他透明剂小,具有高度的透明作用,不会使组织过度硬化。缺点是透明慢,不易被石蜡所代替,所以组织经香柏油透明后,最好再经二甲苯透明。 (五)透蜡 透蜡时间以能取代组织内的透明剂,并充分渗入石蜡为原则。先将组织块放入二甲苯加石蜡各半的混合液中,于52—58温箱内放置1小时,然后将标本移入保持在52—58温箱中的石蜡2—3小时,或更长时间。一般的浸蜡时间为4—6小时 。如用松油醇、香柏油透明,则要延长透蜡时间。冬天用溶点53—54石蜡,夏天用56—58石蜡。 (六)包埋 将溶解的石蜡倒入金属包埋框中(在倒入石蜡前,先将包埋框的内面涂布液体石蜡,以便冷却后,石蜡所埋的组织块易于脱离)。再将透过蜡的组织块放入包埋框的中央,并将预备切的组织面向下。等到石蜡表面形成薄膜时,立即将包旱器沉入冷水内15—20分钟。取出石蜡块,按照组织块大小划分若干块加以修整,组织外面应留有适当的石蜡。 (七)切片及附贴 1.将蜡块固定在切片机上,使蜡块的切面与刀口成平行方向。刀的倾斜度通常为15度,调整切片厚度,转动圆盘,切成4—6微米厚度的切片。 2.右手旋转轮,左手持笔轻轻拨起切片,然后把切片放入盛有35—40温水的培养皿或其它容器中展平。 3.切片移铺在涂有蛋白甘油的载玻片上,送入烤片箱(49—50,勿高于熔点),烤片一昼夜为宜,过早取出染色,易使蜡片脱落。 (附)蛋白甘油的配制方法: 鸡蛋白 50毫升 甘油 50毫升 将鸡蛋白充分搅拌,用滤纸过滤,加等量甘油配成,并加入少许柳酸钠或麝香草酚防腐。平时放在冰箱中保存。 (八)染色 1.染色前的准备工作 (1)组织片经二甲苯脱蜡10—20分钟。 (2)脱二甲苯。切片从高浓度酒精开始,逐渐移入低度酒精,即100%、95%、80%、70%、50%,各级酒精5分钟左右,然后水洗5分钟以上。 2.苏木素—伊红染色法 染色顺序: (1)切片经脱蜡到水洗。 (2)移入Harris苏木素液内10—15分钟(淋巴组织染色时间要缩短)。苏木素主要染细胞核。 (3)水洗。 (4)移入1%盐酸酒精分化数秒至半分钟(褪去胞浆颜色,保存细胞核颜色,此种区别作用称为分化)。 (5)中和。在加数滴饱和碳酸锂溶液的水中处理半分钟。 (6)流水充分洗涤。 (7)移入0.5—1%伊红酒精溶液复染2—3分钟(主要染细胞浆)。 (8)脱水。80%、95%和10%酒精各5分钟。 (9)透明。二甲苯透明10—15分钟。 (10)封固。切片上滴以中性加拿大树胶,然后盖上盖玻片,干后即可观察。 (附)Harris苏木素液配制方法: 苏木素 0.9克 纯酒精 10.9毫升 铵(或钾)明矾 20.9克 蒸馏水 200.0毫升 先将苏木素溶于纯酒精中,另将钾明矾溶于水中,再把苏木素液和明矾均匀混和,倒入烧杯,迅速煮沸,此时再加入一氧化汞0.5克,用玻棒拌匀,氧化,溶液很快变成深紫色。即将烧杯移入冷水中,使溶液迅速冷却。第二天将溶液过滤即成。在应用前每100毫升苏木素液内加冰蜡酸2—4毫升。 五、思考题 1.组织块脱水时注意事项是什么? 2.组织块透明时注意事项是什么? 3.封片时注意事项是什么? 实验六 药物的配伍禁忌 一、实验目的 通过实验,观察两种或两种以上的药物配合在一起时,可能产生的配伍禁忌,了解药物配伍禁忌的实际意义。熟悉药物的配伍禁忌,培养学生在开写处方时能正确配用药物。 二、实验要求 1.实验前应预习实验指导书,了解本次实验的目的、原理和方法。 2.进入实验室后,应注意听取指导教师对实验方法的讲授,待完全弄清楚实验方法与步骤后,方能动手实验。 3.实验时,应注意观察实验现象,细心读取实验数据。若对实验结果有疑问,应重做实验。 4.实验过程中,须保持实验场所整洁安静,做到文明实验。应爱护仪器设备及实验室其他公物,末经允许不得随便打开或关闭实验室的电路开关,如有设备损坏应立即报告指导教师。 三、实验原理 药物配伍指在药剂制造或临床用药过程中,将两种或两种以上药物混合在一起。药物配伍恰当可以改善药剂性能,增强疗效。在配伍时,若发生不利于质量或治疗的变化则称配伍禁忌。配伍禁忌分为物理性、化学性和药理性三类。物理性配伍禁忌是指药物配伍时发生了物理性状变化。化学性配伍禁忌是指配伍过程中发生了化学变化,发生沉淀、氧化还原、变色反应,使药物分解失效。药理性方面药理性配伍禁忌:即两种或两种以上药物互相配伍后,由于药理作用相反,使药效降低、甚至抵消的现象。 四、实验材料、仪器和试剂 1.耗材及试剂试管架、试管、1ml注射器、5号针头、药匙、乳钵、平皿、烧杯、量筒、玻璃棒

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